一、产品简介：

三磷酸腺苷（ATP）是生物体内能量转换最基本的载体,是生物体内最直接的能量来源，测定ATP 含量并且计算能荷，能够反映能量代谢状态。

三磷酸腺苷（ATP）在己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶混合酶的作用下，使ATP 水解并伴随着NADPH 的生成，通过检测340nm 下NADPH 的增加量，进而计算得到ATP 的含量。

二、试剂盒的组成和配制：

三、所需的仪器和用品：

紫外分光光度计、1mL 石英比色皿（光径 1cm）、恒温培养箱、可调式移液枪、水浴锅、研钵和蒸馏水。

四、ATP 含量检测：

建议正式实验前选取2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、样本制备：

① 组织样本：

称取约0.1g 组织加入研钵中，加入1mL 提取液，进行冰浴匀浆，12000rpm，4℃离心10min，取上清液，置冰上待测。

【注】：也可以按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例提取

② 细菌/真菌样本：

先收集细菌或细胞到离心管内，离心弃上清；取500 万细菌或细胞加入1mL 提取液；冰浴超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3S，间隔10S，重复30 次）；12000rpm，4℃离心 10min，取上清液，置冰上待测。

【注】：也可按照细菌或细胞数量（10⁴ 个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例进行提取

③ 液体样本：澄清的液体直接检测；若浑浊则离心后取上清检测。

④ 高蛋白含量样本：

④-1：称取约0.1g 组织加入研钵中，加入1mL 蒸馏水，进行匀浆，转至EP 管中，于

95℃水浴中煮5min，取出冷却至室温后于12000rpm，室温离心10min，上清液待测。

④-2：或称取约 0.1g   组织加入研钵中，加入 0.5mL   高氯酸（0.5M），进行冰浴匀浆，8000rpm，4℃离心10min，取全部上清至另一EP 管中，再加入与上步所取上清液等体积的KOH 或NaOH（0.5M）混匀，使整个液体PH 近中性，若澄清直接检测，若浑浊则8000rpm，4℃离心5min 后取上清液测定，此时整个上清液体积记为V3。

2、上机检测：

① 紫外分光光度计预热 30 min 以上，调节波长到340nm，蒸馏水调零。

② 试剂解冻至室温（25℃），或可放在 25℃条件下水浴 5-15min。

③ 试剂一和二和三可按照 20:20:600 比例配成混合液（一枪加640μL 该混合液）（该混合液用多少配多少，现配现用）。

④ 在 1mL 石英比色皿（光径1cm）中依次加入：

【注】若ΔA 小于0.01，可增加样本量V1（如100μL，则试剂三相应减少）。或增加样本

取样质量W 和细胞数量，则改变后的V1 或W 或细胞数量需代入计算公式重新计算。

五、结果计算：

1、按样本鲜重计算：

ATP 含量(μmol/g 鲜重)=[ΔA÷(ε×d)×V2×10⁶]÷(W×V1÷V) =2.78×ΔA÷W

2、按细菌/细胞密度计算：

ATP 含量(nmol/10⁴ cell)=[ΔA÷(ε×d)×V2×10⁹]÷(细胞数量×V1÷V) =2777.8×ΔA÷细胞数量3、液体中ATP 含量计算：

ATP 含量(μmol/mL)=[ΔA÷(ε×d)×V2×10⁶]÷V1=2.78×ΔA

4、高蛋白样本中ATP 含量计算：

ATP 含量(μmol/g 鲜重)=[ΔA÷(ε×d)×V2×10⁶]÷(W×V1÷V) =2.78×ΔA÷W

ATP 含量(μmol/g 鲜重)=[ΔA÷(ε×d)×V2×10⁶]÷(W×V1÷V3) =2.78×ΔA÷V3 ÷W

ε---NADPH的摩尔吸光系数为6.3×10 ³L/mol/cm；d---光径距离，1cm；

V---提取液体积，1mL； V1---样本体积，40μL=0.04mL；V2---反应总体积，700μL=7×10^-4L； ATP分子量---551.14；

V3---高蛋白组织样本最终上清液总体积，mL； W---样本质量，g；细胞数量---万。