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一、产品简介：
3-磷酸甘油(G3P)被被甘油磷酸氧化酶(GPO)氧化生成过氧化氢(H2O2)，H2O2 与4-氨基氨替吡啉等反应生成红色醌类化合物，其在510nm 处有特征吸收峰，通过检测510nm 处吸光值即可得出甘油含量。
二、试剂盒的组分与配制：
试剂名称 | 规格 | 保存要求 | 备注 |
提取液 | 液体60mL×1 瓶 | 4℃保存 | |
试剂一 | 粉剂mg×1 瓶 | 4℃保存 | 用前甩几下使试剂落入底部，再 加1.1mL 蒸馏水，充分震荡溶解 |
试剂二 | 液体30mL×1 瓶 | 4℃保存 | |
试剂三 | 液体6mL×1 瓶 | 4℃保存 | |
标准品 |
液体1mL×1 支 |
4℃保存 | 本标准品即3-磷酸甘油的浓度为 8mM，稀释1 倍后成4mM 用于标准品待检测液。 |
三、所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径1cm）、可调式移液枪、离心机、研钵。
四、3-磷酸甘油(G3P)含量测定：
建议正式实验前选取2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：
称取约0.1g 组织样本加入研钵中，加入1mL 提取液，在冰上进行匀浆，12000rpm，
4℃或室温离心10min，取上清液待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液(mL)为1：5~10 的比例进行提取。
② 细菌/细胞样本：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约500 万细菌或细胞加入1mL
提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率200W，超声3s，间隔10s，重复30 次）；
12000rpm 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为500~1000：1 的比例进行提取。
③ 液体样本：澄清的液体样本直接测定，若浑浊则离心后取上清检测。
2、上机检测：
① 可见分光光度计预热 30min，调节波长到510 nm，蒸馏水调零。
② 所有试剂解冻至室温（25℃）。
③ 在 EP 管中依次加入：
试剂名称（μL） | 测定管 | 标准管 （仅做一次） | 空白管 （仅做一次） |
标准品 | 30 | ||
样本 | 30 | ||
试剂一 | 20 | 20 | 20 |
试剂二 | 530 | 530 | 560 |
试剂三 | 120 | 120 | 120 |
混匀，室温（25℃）避光孵育60min，将全部液体转移至1mL 比色 皿中于 510nm 处读取各管A 值（直到 2min 内A 值变化不超过 0.05）。 | |||
【注】若测定管的A 值大于1，则需将样本进行稀释（用提取液稀释）或减少样本加样量V1（如减至20μL，则试剂二相应增加），稀释倍数D 或样本量V1 需代入计算公式重新计算。
五、结果计算：
1、按样本质量计算：
3-磷酸甘油(μmol/g 重量)=(C 标准×V2) ×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷(W×V1÷V) ×D
=4×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白) ÷W×D
3-磷酸甘油(μg/g 重量)=(C 标准×V2) ×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷(W×V1÷V) ×D
=864.16×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白) ÷W×D
2、按细胞数量计算：
3-磷酸甘油(μmol/104 cell)=(C 标准×V2) ×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷(500×V1÷V) ×D
=4×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白) ÷500×D
3-磷酸甘油(μg/104 cell)=(C 标准×V2) ×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷(500×V1÷V) ×D
=864.16×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白) ÷500×D
3、液体中甘油含量计算：
3-磷酸甘油(mmol/L)=(C 标准×V2) ×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷V1×D
=4×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白) ×D
3-磷酸甘油(μg/mL)=(C 标准×V2) ×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷V1×D
=864.16×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白) ×D
C 标准---4mmol/L=4μmol/mL=864.16μg/mL； V---提取液体积，1mL；
V1---样本加入体积，0.03mL； V2---标准品加入体积，0.03mL；
500---细胞数量，万； D---稀释倍数,未稀释即为 1；W---样本取样质量，g。
