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一、产品简介：
葡萄糖-6-磷酸（G6P）是在碳六上磷酸化的葡萄糖。大多数进入细胞的葡萄糖被磷酸化为 G6P，除了参与糖酵解和磷酸戊糖代谢途径，葡萄糖6-磷酸还可以转化为糖原或淀粉。
本试剂盒提供一种简单，灵敏，快速的测定方法：葡萄糖-6-磷酸（G6P）被特异的酶作
用，过程中产生的NADH 与一种灵敏显色探针结合，在450nm 处有最大吸收波长。其生成的有色物质颜色强度与样品中的G6P 浓度成比例。
二、试剂盒组成和配制：
试剂名称 | 规格 | 保存要求 | 备注 |
提取液 | 液体60mL×1 瓶 | 4℃保存 | |
试剂一 | 粉体mg×1 支 | 4℃保存 | 用前甩几下或离心使试剂落入底部， 再加2mL 蒸馏水溶解备用。 |
试剂二 | 液体1.5mL×1 瓶 | 4℃保存 | |
试剂三 | 粉体mg×1 支 | -20℃保存 | 用前甩几下或离心使试剂落入底部， 再加2mL 蒸馏水溶解备用。 |
试剂四 | 液体30mL×1 瓶 | 4℃保存 | |
标准品 | 液体1mL×1 支 | 4℃保存 | 若重新做标曲，则用到该试剂 |
三、所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、台式离心机、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
四、葡萄糖-6-磷酸（G6P）含量测定：
1、样本制备
① 组织样本：
建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液，进行冰浴匀浆。12000rpm, 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可以按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例提取。
② 细菌/细胞样本：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约500 万细菌或细胞加入1mL
提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；
12000rpm 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为500~1000：1 的比例进行提取。
③ 液体样本：直接检测。
2、上机检测：
① 可见分光光度计预热 30min 以上，调节波长至450nm，蒸馏水调零。
② 试剂解冻至室温（25℃）；
③ 在 EP 管或1mL 玻璃比色皿（光径1cm）中按照下表依次加入试剂：
试剂名称（μL） | 测定管 | 空白对照(仅做一个) |
样本 | 70 | 0 |
试剂一 | 35 | 35 |
试剂二 | 30 | 30 |
试剂三 | 35 | 35 |
试剂四 | 530 | 600 |
混匀，于室温（25℃）条件下反应20min，于450nm 处读 取吸光值A，△A=A 测定-A 空白。 | ||
【注】1.若样本自身有很强的背景值（如较高含量还原性物质：NAD(P)H 或VC 等），可以加设一个样本自身对照：即试剂三用蒸馏水替代，其他试剂保持不变，则△A=A 测定-A 对照。
2. 若△A 的差值在零附近徘徊，可增加样本量V1（如增至100μL，则试剂四相应减少，保持总体积不变），或增加样本取样质量W，则改变后的V1 和W 需代入公式重新计算。
五、结果计算：
1、标准曲线方程：y = 0.033x - 0.0046；x 是标准品浓度：nmol，y 是ΔA。
2、按样本重量计算：
G6P 含量(µg/g 鲜重)＝[(ΔA+0.0046)÷0.033×Mr]÷(W×V1÷V) ×10-3=112.6×(ΔA+0.0046)÷W
3、按细胞数量计算：
G6P 含量(μg/104 cell) =[(ΔA+0.0046)÷0.033×Mr]÷(500×V1÷V)×10-3=0.23×(ΔA+0.0046)×D
4、按照液体体积计算：
G6P 含量(µg/mL)= [(ΔA+0.0046)÷0.0076×V1]÷V1×10-3=112.6×(ΔA+0.0046)
V---加入提取液体积，1 mL； V1---加入样本体积，0.07mL；Mr---葡萄糖-6-磷酸（G6P）分子量；260.1； W---样本质量，g。
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（1μmol/mL）。
2 把母液用蒸馏水稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 0.1,0.2, 0.3, 0.4, 0.5. μmol/mL。也可根据实际样本来调整标准品浓度。
3 依据测定管的加样表操作，根据结果即可制作标准曲线。
