- 产品详情
- 产品参数
- 产品评论
一、产品简介：
本试剂盒利用在强酸溶液中，D-木糖脱水产生糠醛，后者与间苯三酚反应成粉红色物质，经光谱扫描该有色物质在460nm处有最大吸收峰，通过测定该有色物质的吸光值即可计算得出D-木糖的含量。
二、试剂盒组分与配制：
试剂名称 | 规格 | 保存要求 | 备注 |
提取液 | 液体100mL×1 瓶 | 4℃保存 | |
试剂一 |
粉体mg×4 瓶 |
4℃保存 | 临用前甩几下使粉体落入底部，每瓶加入9mL 冰乙酸，混匀溶解后，再慢慢加入0.54mL 浓盐酸混匀；用不完 的试剂避光4℃保存三天。 |
标准品 | 粉体mg×1 支 | 4℃保存 | 若重新做标曲，则用到该试剂。 |
三、所需仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、可调式移液器、冰乙酸、浓盐酸、离心机、蒸馏水。
四、D-木糖含量检测：
建议正式实验前选取2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：
称取约0.1g 样本，加入1mL 提取液，研磨成匀浆，倒入有盖离心管中，置80℃水浴 5min（封口膜缠紧，防止水分散失），冷却后，12000rpm，25℃离心 10min，取上清液待测。
② 液体样品：澄清的液体可直接检测；若浑浊则离心后取上清液检测。
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30min，设定波长到460nm。
② 做实验前选取 2 个样本，找出适合本次检测样本的稀释倍数D。
③ 所有试剂解冻至室温，在 EP 管中依次加入：
试剂（μL） | 测定管 | 空白管（仅做一次） |
样本 | 60 | |
蒸馏水 | 60 | |
试剂一 | 300 | 300 |
混匀，沸水浴（95℃）水浴8min（精确时间；防止水份散失，可 用封口膜缠紧），冷却后取200μL 至96 孔板中，于460nm 处读取吸光值A，△A=A 测定管-A 空白管。 | ||
【注】：测定管的A 值若超过1，可把样本再进行稀释，稀释倍数D 代入计算公式。
五、结果计算：
1、标准曲线方程：y = 17.469x - 0.0066；x 为标准品质量（mg），y 为 ΔA。
2、按样本质量计算：
木糖含量(mg/g)=[(ΔA+0.0066)÷17.469]÷(V1÷V×W)×D=0.954×(ΔA+0.0066)÷W×D
3、按液体体积计算：
木糖含量(mg/L)=[(ΔA+0.0066)÷17.469]÷V1×103×D=954.1×(ΔA+0.0066)×D
木糖含量(mmol/L)=[(ΔA+0.0066)÷17.469]÷V1×103÷Mr×D=6.36×(ΔA+0.0066)×D
V1---加入样本体积，0.06mL； V---提取液体积，1mL；
Mr---D-木糖分子量，150； D---稀释倍数，未稀释即为 1。附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（1mg/mL）：从标准品管中称量取出 2mg 至一新 EP 管中，再加 2mL
蒸馏水混匀溶解即1mg/mL 的标准品（母液需在两天内用且-20℃保存）。
2 把母液用蒸馏水稀释成如下浓度梯度的标准品：0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1mg/mL。也可根据实际样本来调整标准品浓度。
3 依据测定管的加样表操作，根据结果即可制作标准曲线。
